Hepa16貼壁培養細胞株優惠大

Hepa 1-6貼壁培養細胞株優惠大 "

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傳代細胞培養：原代細胞或細胞株或細胞系需在體外持續地培養就傳代，以便獲得穩定的原代細胞或細胞株或細胞系或得到大量的同種細胞，并維持細胞種的延續，這個過程體外培養稱為傳代細胞培養。一般認為，細胞培養形成單層匯合，細胞密度與生存空間有密切的關系，將培養細胞分散，以1:2或l:3或1:4以上的比率轉移分散進行培養，即為傳代細胞培養。細胞傳代后，一般經過三個階段：游離期、指數增生期和停止期。
常用細胞分裂指數表示細胞增殖的旺盛程度，即細胞群的分裂相數/100個細胞。一般細胞分裂指數介于0.2％～0.5％，腫瘤細胞可達3～5％。細胞接種2～3天分裂增殖旺盛，是活力好時期，稱指數增生期(對數生長期)，適宜進行各種試驗。
傳代細胞的培養：（1）吸除或倒掉原瓶中的舊培養基（以25mL培養瓶為例）。（2）每瓶加入2mL,無鈣、鎂PBS，漂洗一次后倒掉。（3）每瓶加入1mL消化液（0.25%胰蛋白酶或0.02%EDTA或混合液），輕輕搖動培養瓶，經消化液鋪滿所有細胞表面，待細胞層略有松動，肉眼可觀察到“薄膜”現象時，倒掉消化液，再繼續作用2~3分鐘，輕輕搖動，細胞層可隨殘留的消化液呈片狀從瓶壁上脫落下來，在顯微鏡下可發現細胞回縮變圓，細胞間隙增大，此時應立即終止消化。（4）加入完全培養基5mL，用吸管反復吹打瓶壁上的細胞，吹打時要按順序進行，以確保所有瓶壁均吹打到，吹打時動作要輕柔，不要用力過大，盡可能不要出現泡沫，以避免細胞的機械損傷。（5）用計數板計數，計算細胞的濃度，并用培養基調整適當的細胞濃度后再分瓶培養。
傳代細胞的建系和維持
1、細胞檔案：細胞檔案要記錄好，如組織來源、生物學特性（由形態、生長繁殖曲線、染色體核型情況、代謝特性、分化特性、病毒敏感性、致瘤特性、有無支原體和潛存病毒等）、培養基的要求、傳代換液時間、擴增時間（分裂指數），細胞的特殊遺傳標志（標記染色體）等，這些記錄對于細胞的正常生長，保持細胞的一致和經長期培養細胞特性的變異比較，都有十分重要的意義。
2、換液傳代：（1）細胞系的傳代、換液方法與前相同，但一般都有自身的規律性，因而在繼續傳代時，要注意保持其穩定的規律性，這樣可以減少由于傳代時細胞密度的頻繁增減或換液時間的不規律而導致細胞生長特性的改變，給以后的實驗帶來影響。（2）多種細胞系維持傳代，要嚴格操作程序，對所用的試劑各系不能交叉。每傳5代后，細胞種子均應凍存。傳代時均應作好記錄，培養瓶上要有明顯標記，標記細胞系名稱和傳代的代數及傳代時間。細胞種子的及時凍存不僅可防止污染丟失，而且還可防止因盲目傳代而造成細胞變異，此外還可提供不同代次的細胞同時進行對比試驗。" "

購買的細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因？研究人員在細胞培養時出現存活率不佳，原因比較復雜，常見原因可歸納為：培養基使用錯誤或培養基品質不佳；血清使用錯誤或血清的品質不佳；解凍過程錯誤；冷凍細胞解凍后，加以洗滌細胞和離心；懸渾細胞誤認為死細胞；培養溫度使用錯誤；細胞置于-80℃太久等。建議嚴格參照ATCC的標準操作規程進行細胞復蘇、凍存等工作。
欲將一般動物細胞離心下來，其離心速率應為多少轉速?欲回收動物細胞，其離心速率一般為300×g(約1OOOrpm),5-10分鐘，轉速過高或離心時間過長都將造成細胞死亡。合適的離心轉速是根據相對離心力決定。RCF=1.119×105×r×(rpm)2，其中r為離心機轉軸中心與離心套管底部內壁的距離；rpm為離心機每分鐘的轉數；RCF(relative centrifugal force)為相對離心力，以重力加速度g(980.66cm/s2)的倍數來表示單位。
為什么培養的細胞要及時傳代？體外培養的細胞大多具有生長接觸抑制的特性，也就是說當一個細胞被其他細胞包圍的時候，它就會停止生長，及時傳代后，細胞的生長得以繼續。
培養細胞生長減慢的原因在哪些?其解決辦法有哪些？可能的原因有：更換了不同的培養液或血清；培養液中一些細胞生長必需成分如谷氨眈肢或生長因子等耗盡或缺乏或己被破壞；培養物中有少量細菌或真菌污染；試劑保存不當；比較新培養液與原培養液成分，比較新血清與舊血清等，找出其它可能的原因。
解決辦法：增加起始培養細胞濃度；讓細胞逐漸適應新培養液；換入新鮮配制培養液；補加谷氨酷肢或生長因子等；用無抗生素培養液培養，如發現污染，去棄培養物，或用抗生素除菌；血清需保存在5℃到20℃; 培養液需在2-8℃避光保存;含血清完全培養液在2-8℃保存，并在2周內用完;分離培養物，檢測支原體。
冷凍管應如何解凍？取出冷凍管后，須立即放入37℃水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1-2分鐘內大部分融化，特別注意，需殘留一小塊冰塊，就可拿到超凈工作臺操作細胞，用75%酒精消毒凍存管，用新鮮培養基將細胞轉移至培養瓶。另外冷凍管由液氮桶中取出解凍時，注意安全，預防冷凍管爆裂。" "

傳代培養及其操作步驟：原代細胞培養成功以后，需要進行分離培養，否則細胞會因生存空間不足或密度過大，營養障礙，影響細胞生長。細胞由原培養瓶內分離稀釋后傳到新的培養瓶中培養的過程稱之為傳代培養。傳代細胞允許培養的細胞擴增(形成細胞株)，可以進行細胞克隆，易于保存，但可能喪失一些特殊的細胞和分化特征。傳代細胞形成細胞株的大利處在于提供了大量持久的實驗材料，便于實驗。
傳代細胞培養操作步驟：（1）吸掉或倒掉培養瓶內舊培養液。（2）向瓶內加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆蓋培養瓶底為宜。（3）置37℃孵箱或室溫（25℃溫度）下進行消化，2-5min后把培養瓶放在倒置顯微鏡下進行觀察，當發現胞質回縮、細胞間隙增大后，應立即中止消化。（4）吸出消化液，向瓶內加入Hanks液少量，輕輕轉動培養瓶，把殘留消化液沖掉，然后再加培養液。如果僅使用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液后，可直接加入少量含血清的培養液，終止消化。（5）使用彎頭吸管，吸取瓶內培養液，按順序反復輕輕吹打瓶壁細胞，使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。吹打時動作要輕柔，以防用力過猛損傷細胞。（6）用計數板計數后，分別接種于新的培養瓶中，置CO2培養箱中進行培養。（7）細胞培養換液時間應根據細胞生長的狀態和實驗要求來確定。一般2-3d后應換一次生長液。待細胞鋪滿器皿底面，即可使用；也可繼續傳代擴大培養或換成維持液。
傳代細胞培養注意事項：（1）掌握好細胞消化的時間，消化時間過短時，細胞不宜從瓶壁脫落，過長的消化會導致細胞脫落、損傷。（2）掌握好消化濃度，當消化液濃度過高時，消化時間應縮短，過低時細胞消化時間相對延長。
體內細胞培養及其操作步驟：瘤細胞懸液接種（1）無菌選取生長良好(有光澤，淡紅色)瘤組織或對數生長期培養瘤細胞。（2）在PBS中將瘤組織剪碎后用勻漿器研磨，經80～100目篩網過濾成細胞懸液。（3）培養細胞應用PBS洗兩遍。（4）計數并調整細胞濃度至10(7)～10(8)/ml。（5）常規消毒后，于接種部位(通常為背部或腋窩腹股溝皮下)用醫用注射器皮下潛行一段后注入細胞懸液(0.1ml/部位，＞10(6)細胞)。初次接種成功率低，細胞數盡可能多一些。（6）次日注意觀察動物一般情況。初次接種一般有一段較長的潛伏期，以后隨著傳代潛伏期逐漸縮短，后固定為一個相對穩定的時間。
腹水瘤的建立與腹水瘤的接種：將實體瘤細胞直接種于小鼠腹腔、腹壁或其他部位，引起腹水，腹水中含有瘤細胞，將這種腹水反復傳代，即可成為腹水瘤。初次傳代時，腹水常呈血性(含大量紅細胞)，反復傳代后腹水逐漸變成乳白色。腹水瘤的接種過程如下。（1）將凍存或培養的腹水瘤細胞離心和洗滌，進行細胞計數。（2）消毒動物，左下腹穿刺接種1×10(6)腹水瘤細胞。（3）接種腹水瘤細胞后約7-12d，待小鼠腹部明顯膨大。用碘酒棉球消毒小鼠腹部，用9號針頭抽取腹水，也可行腹部解剖后，用滴管吸取。每只小鼠可抽3-5ml。（4）抽取的腹水經3000rpm離心15min，收集上清，分裝凍存備用。
培養細胞的凍存及復蘇：細胞低溫凍存是培養室常規工作和通用技術。細胞凍存在-196℃液氮中，儲存時間幾乎是無限的。細胞凍存及復蘇的原則是慢凍快融。
凍存細胞：（1）選對數增生期細胞(證明無支原體污染)，在凍存前1d換液。（2）按常規方法把培養細胞制備成懸液，計數，使細胞密度達5×10(7)/ml左右密度，離心，去上清。（3）加入配制好的凍存液（培養液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO 1ml，5.6%NaHCO3 0.1ml），按與去上清相同的量一滴一滴加入離心管中，然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。凍存細胞時培養液中加入保護劑10％二甲基亞砜(DMSO) 或甘油，可使冰點降低，使細胞內水分在凍結前透出細胞外。（4）分裝于無菌凍存管中，每管加1.5m懸液。（5）旋好凍存管并仔細檢查，一定要蓋緊，做好標記。（6）凍存：在特殊的儀器或簡易的液氮容器中，按-1℃/min的速度，在30～40min時間內，下降到液氮表面，再停30min后，直接投入液氮中。要適當掌握下降冷凍速度，過快能影響細胞內水分透出，太慢則促進冰晶形成。操作時應戴防護眼鏡和手套，以免液氮凍傷。
復蘇細胞：（1）從罐中取出凍存管。（2）迅速放入36℃～37℃水浴，不時搖動，使其融化，30～60s內完成。（3）凍存管用70％酒精擦拭消毒后，打開蓋子，用吸管將細胞懸液注入離心管中，再滴加10ml培養液。（4）低速離心(500～1000r/min) 5min，去上清后再用培養液洗一次。（5）用培養液適當稀釋后，裝入培養瓶37℃培養，次日更換一次培養液后，繼續培養。以后仍按常規進行培養。凍存細胞數量要充分，密度應達到10(7)/ml，在融后稀釋20倍時，仍能保持5×10(5)/ml數量。" "

公司已合作單位有山西中醫學院、福建醫科大學附屬二醫院、上海市六人民醫院、北京大學醫學部、四平中心醫院、廣州中醫藥大學、中科院上海生命科學研究院生化與細胞研究所、解放軍306醫院、江南大學、西南醫院、吉首大學、西南大學化學化工學院、寧波大學、福建醫科大學附屬醫院、中南大學、延安大學附屬醫院、中國科學院上海藥物研究所、天津市兒童醫院、江蘇省中醫藥研究院、湘雅醫學院、四軍醫大學預防系勞動與環境教研室、揚州大學、上海交通大學、中國醫科大學、浙江省立同德醫院、中國人民解放軍150中心醫院、蘇州大學、四川大學華西醫院、云南大學、揚州大學獸醫學院、上海交通大學醫學院附屬九人民醫院、海南醫學院、江蘇腫瘤醫院、上海市閔行區中心醫院、大連醫科大學附屬醫院、中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院、沈陽藥科大學、廣州市八人民醫院、南京大學、浙江中醫藥大學、蘭州大學、上海中醫藥大學、中國農業科學院飼料研究所、廈門市婦幼保健院、重慶大學、南京軍區總醫院、天津市人民醫院、北京醫學科學腫瘤醫院、江蘇大學、桂林醫學院附屬醫院、中國科學院化學研究所、、鄭州大學附屬醫院、湖北省人民醫院、四川大學華西二醫院、廣州中醫藥大學附屬醫院、黑龍江中醫藥大學附屬醫院、青海紅十字醫院、廣州醫學院附屬醫院、北京紅十字朝陽醫院、中國醫科大學附屬一院、江西中醫學院附屬醫院、北京中醫藥大學東直門醫院、山西醫科大學附屬醫院、上海長海醫院、北京阜外醫院、北京安貞醫院、上海遠大心胸醫院、哈爾濱醫科大學臨床醫學院、廣東霍英東心臟中心、中山醫科大學中山眼科中心、天津眼科醫院、溫州醫學院附屬眼視光醫院、北京兒童醫院、重慶醫科大學附屬兒童醫院、復旦大學附屬兒童醫院、南京中醫藥大學附屬二醫院、湖北十堰市太和醫院、濟南市兒童醫院、中南大學湘雅二醫院、天津醫科大學代謝病醫院" "

C4140 HeLa[Chang Liver]張氏肝貼壁復蘇細胞株
C4141 SNU-398人肝癌貼壁復蘇細胞株
C4222 WI－38AV13人SV－40轉化肺成纖維貼壁復蘇細胞株
C4225 NCI-H1755[H1755]人肺癌貼壁復蘇細胞株
C4226 NCI-H838[H838]人肺癌貼壁復蘇細胞株
C4227 NCI-H1563[H1563]人胚肺貼壁復蘇細胞株
C4228 NCI-H2170[H2170]人肺鱗狀四代細胞癌
C4230 SW 1271[SW-1271 SW1271]人肺腺癌貼壁復蘇細胞株
C4231 NCI-H1703[H1703]人肺癌貼壁復蘇細胞株
C4232 NCI-H226[H226]人肺癌貼壁復蘇細胞株
C4233 NCI-H1869[H1869]人肺癌貼壁復蘇細胞株
C4234 SW 900[SW-900 SW900]人肺癌貼壁復蘇細胞株
C4303 HEK-293Ad5DNA轉化的胚腎
C4310 G401人腎癌Wilms貼壁復蘇細胞株
C4401 ZR75-1人貼壁復蘇細胞株
C4402 ZR75-30人貼壁復蘇細胞株
C4405 Hs-578T人貼壁復蘇細胞株
C4417 UACC812人乳腺導管瘤貼壁復蘇細胞株
C4426 AN3 CA人子宮內膜腺癌貼壁復蘇細胞株
C4429 HeLa229人宮頸癌四代細胞(HPV-18 永生化四代細胞)
C4430 HeLa-S3人宮頸癌貼壁復蘇細胞株
C4435 DU-145人前列腺癌貼壁復蘇細胞株
C4441 RWPE2人前列腺上皮貼壁復蘇細胞株
C4450 Hs 1.Tes正常人睪丸貼壁復蘇細胞株
C4451 Hs 181.Tes正常人睪丸貼壁復蘇細胞株
C4452 LNCaP clone FGC前列腺癌貼壁復蘇細胞株
C4502 HL60人原髓四代細胞白血病貼壁復蘇細胞株
C4526 WEHI 22.1B淋巴貼壁復蘇細胞株
C4529 JurkatClone E6-1T 淋巴四代細胞白血病貼壁復蘇細胞株
C4530 EB-3[EB3]人淋巴樣Burkitt淋巴瘤貼壁復蘇細胞株
C4702 U87MG人惡性膠質母四代細胞瘤貼壁復蘇細胞株
C4724 HT1080人成纖維肉瘤貼壁復蘇細胞株
C4729 SW 1088[SW-1088 SW1088]人腦星型膠質瘤貼壁復蘇細胞株
C4731 TE 354.T人皮膚基底四代細胞癌
C4732 TE 353.Sk人正常皮膚貼壁復蘇細胞株
C4733 SJCRH30[RC13 RMS 13 SJRH30]人骨髓橫紋肌肉癌貼壁復蘇細胞株
C4736 45.6.TG1.7骨髓瘤
C4737 T/G HA-VSMC人主動脈血管平滑肌貼壁復蘇細胞株
C4740 hFOB 1.19人SV40轉染成骨貼壁復蘇細胞株
C5003 RAW 264.7小鼠單核巨噬四代細胞白血病貼壁復蘇細胞株
C5011 B16F1小鼠黑色素瘤貼壁復蘇細胞株
C5012 B16-Fo鼠黑色素瘤四代細胞系
C5013 B16F10小鼠黑色素瘤高轉移貼壁復蘇細胞株
C5015 Hepa 1-6小鼠肝癌貼壁復蘇細胞株
C5025 VERO E6猴腎四代細胞系
C5035 CT-26.WT小鼠大腸癌貼壁復蘇細胞株
C5066 CHO/dhFr-中國倉鼠腎四代細胞(二氫葉酸還原酶缺陷型)
C5070 EMT6小鼠乳腺
C5083 145-2C11倉鼠/小鼠雜交瘤貼壁復蘇細胞株
C5084 Cl.Ly1+2-/9小鼠T淋巴貼壁復蘇細胞株
C5086 BNL1ME A.7R.1BALB/C小鼠肝上皮貼壁復蘇細胞株
C5093 CHL/IU[CHL-11]中國倉鼠肺貼壁復蘇細胞株"本公司，是一家以主營Hepa 1-6貼壁企業。公司是國內專注于細胞培養的細胞生物學平臺，主要擁有復蘇及凍存細胞系及細胞培養相關技術服務，主要為細胞生命科學研究人員提供有效的技術支持、技術培訓、售后服務，其細胞系主要來源ATCC、Riken、ScienCell、Invitrogen、ECACC、ACC等細胞庫，以及部分國內外細胞研究機構建系。
公司借助強大的細胞系科研團隊和銷售團隊，與國內多家大型綜合醫院、?？漆t院、大學科研機構形成長期的細胞培養戰略合作伙伴關系。